细胞毒性及荧光成像

提交方案
类别:科研方案征集

截止日期:2020-06-30 预算:面议 征集状态:已完结

细胞毒(活)性实验:将细胞接种在96 孔板中,每孔1.5×104 个细胞,分别加入不同浓度的荧光探针(0, 2, 5, 10, 15, 20 μM),保持每孔最终体积为100 μL,置于37℃下,培养24 小时之后,每个孔中加入MTT (10 μL, 5mg/mL) 溶液并在37℃下继续培养4小时,用酶联免疫检测仪测定每个孔溶液在490 nm 处的光吸收值,计算细胞成活率。获得荧光探针的毒性和生物相容性信息。 成像实验:细胞首先在含有10% FBS(胎牛血清,fetal bovine serum)、2.0 mM谷氨酰胺、青霉素(100 units/mL)、链霉素(100 units/mL)的DMEM(达尔伯格氏伊戈尔培养基,Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)溶液中,置于一定湿度的5%二氧化碳混合气体和37℃下的细胞培养箱中进行培养。细胞接种在12孔(1.0×105个/孔)板中。首先,将探针溶液注入到培养皿中培养后,去除培养基并用PBS缓冲溶液冲洗三次,置于激光共聚焦荧光显微镜中进行成像(分别用Ex=356 nm和 Ex=425 nm,观察是否有荧光及拍照);其次,加入不同浓度的Mg2+离子进行培养,用PBS缓冲溶液冲洗三次后,在激光共聚焦荧光显微镜下改变激发波长观察细胞内荧光成像(分别用Ex=356 nm和 Ex=425 nm,观察是否有荧光及拍照)。(成像实验中镁离子浓度和探针浓度根据细胞毒性实验来确定)

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发布日期:2020-05-26
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